AbstrakRubus rosifolius adalah salah satu jenis rasberi liar yang memiliki potensi cukup tinggi untuk dikembangkan sebagai tanaman buah. Selain itu, metode perbanyakan tanaman merupakan salah satu faktor yang berpengaruh dalam pembudidayaan. Lebih lanjut, informasi terkait upaya perbanyakan R. rosifolius secara in vitro masih sangat terbatas. Percobaan ini ditujukan untuk mengetahui metode sterilisasi yang tepat pada eksplan R. rosifolius. Sebanyak 17 metode sterilisasi telah diujicobakan di Laboratorium Kultur Jaringan BKT Kebun Raya Cibodas-LIPI. Bahan sterilisasi yang digunakan, yaitu detergen, tween 80, bakterisida, fungisida, clorox/pemutih (NaClO), alkohol 70%, larutan Plant Preservative Mixture (PPM), vitamin C/asam askorbat, dan povidone iodine/antiseptik. Hasil percobaan menunjukkan bahwa metode sembilan merupakan metode sterilisasi yang cukup optimum untuk sterilisasi eksplan R. rosifolius. Metode sembilan mampu menghambat munculnya mikroorganisme endofitik hingga 8 hari dan tidak menyebabkan warna eksplan menjadi cokelat/browning. Tahapan sterilisasi pada metode sembilan meliputi pencucian dengan detergen, perendaman dengan bakterisida + fungisida selama +30 menit, perendaman dengan clorox 10% + tween 80 selama +15 menit, pencucian dengan larutan PPM selama +15 menit. AbstractRubus rosifolius is one of the species from wild raspberries, which is has high potential to develop as a fruit crops. In the other hand, the technique of plant propagation became an important factor for cultivation. Moreover, the information related to the in vitro propagation of R. rosifolius is very limited. This experiment was aimed to determine the best method to sterilize an explants of R. rosifolius. About 17 methods of sterilization have been tried in the laboratorium of tissue culture at Cibodas Botanical Garden-Indonesian Institute of Sciences. The combination of detergent, tween 80, bactericide, fungicide, sodium hypochlorite (NaClO), alcohol 70%, plant preservative mixture (PPM), ascorbic acid, and povidone iodine were used during the experiment. The results show that the method of sterilization number nine could be inhibit the emergence of endophytic organisms for eight days and keep an explant in green with a little brownish compared by the others methods. The method of sterilization number nine was consist of several steps i.e. wash by detergent, soak in bactericide + fungicide for +30 minutes, soak in sodium hypoclorite 10% + tween 80 for +15 minutes, wash by PPM solution for +15 minutes.